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細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方法

更新時(shí)間:2017-09-30      瀏覽次數(shù):3286
  細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)題目及其解決
 
  1. 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣很輕易生長(zhǎng)??傊琈EM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始。
 
  2. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基?
 
  視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定, 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
 
  3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
 
  不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無(wú)法存活。
 
  4 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
 
  不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
 
  5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?
 
  FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼, 請(qǐng)不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
 
  6 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2?或根本沒(méi)有影響?
 
  一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng), 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí), 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。
 
  7.Hank‘s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank‘s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle‘s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?
 
  HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會(huì)變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。假如??丛贑O2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。假如僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織,用Hanks液就可以了。
 
  8. 細(xì)胞之接種密度為何?
 
  依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因。
 
  9. 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理?
 
  一般僅需持續(xù)加進(jìn)新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中, 稀釋細(xì)胞濃度即可, 若培養(yǎng)液太多時(shí), 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高, 直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶, 加進(jìn)新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度, 重復(fù)前述步驟即可。
 
  10.冷凍管應(yīng)如何解凍?
 
  取出冷凍管后, 須立即放進(jìn)37 °C 水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并留意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須留意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
 
  11. 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上往除DMSO?
 
  除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 盡大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放進(jìn)含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以往除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之題目。
 
  12. 附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度?應(yīng)如何處理?
 
  一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中, 保存于–20 °C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低, 并可減少污染之機(jī)會(huì)。
 
  13.欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?
 
  欲回收動(dòng)物細(xì)胞, 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10 分鐘, 過(guò)高之轉(zhuǎn)速, 將造成細(xì)胞死亡。
 
  14. 細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?
 
  動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。留意:由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能, 故不可將DMSO 直接加進(jìn)細(xì)胞液中, 必須使用前先行配制完成。
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